LncRNA-seq(Long non-coding RNA sequencing)是一种专门用于研究长非编码RNA(lncRNA)的转录组测序手艺。lncRNA是一类长度凌驾200个核苷酸的RNA分子,不具备编码卵白质的能力,但在细胞内施展着主要的调控功效。
1.数据预处置惩罚:对原始测序数据举行质量控制和过滤,去除低质量的读段、讨论序列和重复序列等。同时,还可以对数据举行去除rRNA序列的操作,以镌汰滋扰。
2.序列比对:将预处置惩罚后的测序数据与参考基因组举行比对,使用比对工具(如Bowtie、BWA、STAR等)举行序列比对。这一办法将确定每个读段的泉源位置,并将其映射到基因组上。
3.表达量盘算:凭证比对效果,统计每个基因(包括lncRNA)的读段数或笼罩度,来预计其表达量。常用的要领包括RPKM(Reads Per Kilobase of transcript per Million mapped reads)或FPKM(Fragments Per Kilobase of transcript per Million mapped fragments)。
4.差别表达剖析:通过较量差别样品之间的lncRNA表达量,可以判断差别表达的lncRNA。常用的差别表达剖析要领包括DESeq、edgeR等。这些要领可以凭证统计学模子,识别差别表达lncRNA并盘算其显著性。
5.功效注释和富集剖析:对差别表达的lncRNA举行功效注释,即将其映射到已知基因的功效注释数据库中,如Gene Ontology (GO)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)等。别的,还可以举行富集剖析,寻找差别表达lncRNA在特定生物历程、通路或功效上的富集情形。
6.主要lncRNA验证:通过实验验证差别表达lncRNA的生物学功效和调控机制,例如,通过定量PCR、Northern blot、Western blot等要领验证测序效果的准确性和可靠性。
1.高质量的数据天生
2.完整的笼罩规模
3.多维度的数据剖析
4.专业的数据解读
5.报告以及定制化的效劳
1.长链非编码RNA测序(LncRNA-Seq)是一种专门用于研究长链非编码RNA(lncRNA)表达的高通量测序手艺。lncRNA是一类不编码卵白质但在基因调控、细胞历程等方面饰演主要角色的RNA分子。以下是一些LncRNA-Seq的应用偏向:
2.lncRNA表达调控研究: LncRNA-Seq用于研究差别细胞类型、组织、发育阶段、心理状态或疾病状态下lncRNA的表达转变,资助相识lncRNA在基因调控中的作用。
3.lncRNA与疾病关联研究: 通过较量疾病患者和正常比照组的lncRNA表达数据,可以判断与疾病相关的lncRNA,从而深入相识lncRNA在疾病爆发气制中的作用。
4.lncRNA与转录因子互作研究: LncRNA-Seq可以展现lncRNA与转录因子之间的相互作用,资助明确lncRNA在基因调控网络中的位置和功效。
5.lncRNA与染色体构象和三维结构研究: 通过LncRNA-Seq可以研究lncRNA怎样加入染色体的空间结构和组装,以及其在维持基因组稳固性中的作用。
6.lncRNA与细胞周期、凋亡和分解研究: LncRNA-Seq可以资助相识lncRNA在细胞周期、凋亡和分解等生物学历程中的功效。
7.lncRNA作为生物标记物的应用: 部分lncRNA在特定疾病状态下表达显着转变,可以作为潜在的生物标记物,用于疾病的诊断和监测。
8.lncRNA与药物治疗研究: 相识lncRNA在疾病中的作用有助于研发针对lncRNA的治疗战略,如lncRNA作为药物靶点或治疗调控剂。
9.lncRNA与癌症研究: LncRNA-Seq在展现癌症中lncRNA的表达转变、调控网络以及其在癌症爆发和生长中的功效方面有普遍应用。
Lnc956-TRIM28-HSP90B1 complex on replication forks promotes CMG helicase retention to ensure stem cell genomic stability and embryogenesis(Science advances,IF=13.6)
RNA-seq展现Lnc956在小鼠多醒目细胞基因组稳固和增进胚胎发育的主要作用
复制压力是内源性DNA损伤的主要泉源。只管在复制叉上发明了许多卵白质调理复制叉或复制机制的运动,但非编码RNAs是否可以在障碍的复制叉上并施展要害的调理作用仍未被探索。作者判断了一个全新长链非编码RNA NONMMUT028956(简称Lnc956),该LncRNA主要在小鼠胚胎干细胞中表达。作者发明Lnc956在复制叉上积累,避免其崩塌,坚持基因组稳固性,对小鼠胚胎爆发至关主要。在机制上,它以相互依赖的方法在共济失调性毛细血管扩张和Rad3相关(ATR)信号下游驱动Lnc956-TRIM28-HSP90B1复合体在障碍复制叉上的组装。Lnc956-TRIM28-HSP90B1复合物通过TRIM28与MCM2-MCM7六聚体物理团结,并直接调理CDC45-MCM-GINS (CMG)解旋酶在染色质上的坚持力。Lnc956-TRIM28-HSP90B1对CMG解旋酶坚持力的调理是由HSP90B1的朋侪功效介导的。总之,该研究效果首次发明了小鼠多醒目细胞复制叉上特异性功效性长非编码RNA-Lnc956,并展现了Lnc956维持多醒目细胞基因组稳固和增进胚胎发育的分子机制。